العربية
| نموذج: | الدوكسيسيكلين هيدروكلوريد/دوكسيسيكلين حمض الهيدروكلوريك |
|---|---|
| المنتج العلامة التجارية: | KSW |
| CAS رقم: | 10592-13-9 |
| اسم المنتج: | الدوكسيسيكلين هيدروكلوريد/دوكسيسيكلين حمض الهيدروكلوريك |
| الوزن الجزيئي الغرامي: | 480.896 جم/مول |
| الصيغة الجزيئية: | C22H25Cln2O8 |
| الكمية: | |
| وصف | Doxycycline هيدروكلوريد هو مثبط المضاد الحيوي التتراسيكلين ومثبط ميتالوبروتيناز (MMP). |
|---|---|
| الكتالوج ذات الصلة | نطاقات البحث >> عدوى |
| هدف | MMP |
| في المختبر | يُظهر الدوكسيسيكلين فعالية ممتازة وخصائص تعتمد على الوقت ضد سلالة M. gallisepticum S6 في المختبر [2]. الخلايا العظمية المعرضة للمركب الذي يحتوي على 25 ميكروغرام/مل من الدوكسيسيكلين (DOX)/β-cyclodextrin (βCD) زادت من تكاثر الخلايا (P <0.05) مقارنةً بالسيطرة على جماهير العظم العظمي في جميع نقاط الوقت التجريبية في الأسبوع الثاني. يتم أيضًا ارتفاع نشاط الفوسفاتيز القلوي (AP) ومستويات إفراز الكولاجين في الخلايا العظمية المعرضة لمركب DOX/βCD (P <0.05 مقابل الضوابط) وتصل إلى الحد الأقصى بعد 14 يومًا [3]. الدوكسيسيكلين (20 نانومتر) يمنع إنتاج ECM (مصفوفة خارج الخلية) وإعادة تشكيلها في كل من أنواع الخلايا العضلية (SMC) من الثقافات ، وتوليف الكولاجين والبروتينات المتساوية في SMC-CH (نظام غذائي غني بالكوليسترول) أعلى من SMC -C (نظام غذائي قياسي) [4]. |
| في الجسم الحي | في الفئران المغلقة غير المتجانسة (HT) Col3A1 ، بعد 3 أشهر من العلاج مع الدوكسيسيكلين أو الدواء الوهمي ، تتعرض الفئران HT البرية (WT) البرية (WT) للتأكيد الجراحي للأوردام. يتم منع زيادة 3 أضعاف في الآفات الأبهر الناتجة عن الإجهاد الموجودة في الفئران HT غير المعالجة بعد أسبوع واحد من التدخل (الدرجة التراكمية 4.5 ± 0.87 مقابل 1.3 ± 0.34 في WT ، P <0.001) بالكامل في الدوكسيسيكلين (25 أو 100 ملغ/كغ/كغ/كغ. ، ص.)-المجموعة المعالجة (1.1 ± 0.56) [1]. |
| فحص كيناز | تتم إضافة الجيلاتين (0.1 ٪ (ث/ت) إلى خليط بلمرة Laemmli Acrylamide القياسية. يتم خلط مستخلص الأنسجة 1: 2 مع عينة العازلة [250 مم Tris-Cl PH 6.8 ، 10 ٪ (W/V) SDS ، 20 ٪ (V (V /v) الجلسرين ، 0.005 ٪ (ث/ت) الأزرق البرومفينول]. مصل مخفف 1:10 مع العازلة الكهربائية (2.5 ملم تريس ، 20 مم جليكاين ، 0.005 ٪ SD) ومختلطة 1: 2 مع العينة العازلة. تم تحميله بعد الحضانة لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة دون غليان. بعد الكهربائي عند 90 فولت ، يتم نقع المواد الهلامية في 2.5 ٪ (W/V) Triton X-100 ، حضنت من 2 إلى 3 أيام عند 37 درجة مئوية في المخزن المؤقت للهضم الجيلاتين [50 MM TRIS-Cl ، PH 8.0 ، 8 مم CACL2 ، 10 مم ZNSO2 ، 0.02 ٪ (W/V) NAN3] ، ملطخة بنسبة 0.05 ٪ Coomassie Blue R-250 في حمض الأسيتيك/الميثانول/الماء (1: 4.5: 4.5 بحجم الحجم ) ، المزعوم في حمض الأسيتيك بنسبة 10 ٪ و 5 ٪ الميثانول ، وتم مسحها ضوئيًا لكثافة نطاق التحلل. تتناسب شدة نطاق التحلل مع نشاط الجيلاتيناز ويتم قياسها بشكل كثيف باستخدام برنامج المسح الضوئي أحادي البعد. النتيجة ، رقم بين 0.07 و 3.75 ، يتم تطبيعها إلى محتوى البروتين عن طريق تقسيم نتيجة قياس الكثافة مع الكثافة البصرية النسبية من نتيجة مجموعة البروتين BCA. يتم استخدام النتيجة للتحليل كوحدة تعسفية. بالنسبة إلى إجمالي نتائج نشاط MMP لأشرطة تحلل من Pro-MMP-9 ، تتم إضافة MMP-9 النشط ، Pro-MMP-2 ، و MMP-2 النشط. يتم استخدام علامة حجم البروتين لتحديد الحجم الصحيح. |
| فحص الخلايا | يتم إجراء جميع العلاجات في المختبر في ثقافات SMC بنسبة 90 ٪ ، عندما يبدأ توليف ECM في SMC. يتم تخفيف الدوكسيسيكلين (20 نانومتر) في وسط الثقافة بتركيز 10 ميكروغرام/مل (20 نانومتر) ، حيث تم الإبلاغ عن أي سمية أو تباين في تكاثر SMC الأولي ، وكذلك في خطوط الخلايا الأخرى ووقت الحضانة هو 48 ح. يتم زرع SMC-C و SMC-CH بكثافة متساوية في الخلايا في لوحات 6 بئر ، وعندما يصل التقاء إلى 90 ٪ ، تتم إضافة وسيط ثقافة 1 مل إلى كل بئر يحتوي على 3.7 × 104 BQ L- [5-H3] -Proline (9.62 × 1011 BQ/MMOL). بعد 48 ح حضانة ، يتم تحضير الخلايا مع 0.5 مل 0.5 مول/لتر من NAOH لمدة 1 ساعة. يتم تحييد المحلول الناتج مع كمية متساوية من 0.5 مول/لتر HCl ، و 50 ميكرولتر تستخدم لقياس الكلي بروتينات مع طريقة برادفورد. يضاف حجم واحد من 10 ٪ TCA إلى 250 ميكرولتر المتبقية وطرد مركزي عند 13000 غرام ل 15 دقيقة في 4 درجات مئوية. يتم إذابة الترسب الناتج في 100 ميكرولتر 0.2 مول/لتر NaOH ، ثم تحييد مع 1 مول/لتر حمض الهيدروكلوريك. يتم تحضين المحلول مع المخزن المؤقت للكولاجيناز (TRIS-HCL ، درجة الحموضة 7.6 20 مم ، وتركيز CACL2 250 مم) و 10 وحدات من الكولاجيناز عند 37 درجة مئوية خلال الليل. ثم ، تتم إضافة 150 ميكرولتر 10 ٪ TCA وطردها في 13000 غرام ل 15 دقيقة في 4 درجات مئوية. يضاف الطاف الناتج إلى 4 مل من سائل التلألؤ ويتم قياس النشاط الإشعاعي في عداد التلألؤ السائل LS 600 TA. |
| مسؤول الحيوانات | تتم معالجة مجموعتين من الفئران المتجانسة غير المتجانسة (HT) COL3A1 البالغة من العمر 6 أشهر لمدة 3 أشهر مع الدوكسيسيكلين. يتم توفير العلاج مع طعام يحتوي على 200 أو 800 ملغ/كغ من الدوكسيسيكلين. نظرًا لأن متوسط تناول الطعام الأولي المقاس لهذه الفئران يبلغ متوسطه 3.5 جم/يوم ومتوسط وزن الجسم للحيوانات هو 25 غرام ، ومتوسط جرعة المخدرات للمجموعات منخفضة وذات جرعة عالية هو 25 (doxy25) أو 100 (doxy100) ملغ/ كجم يوميا ، على التوالي. يتم الحفاظ على الفئران غير المعالجة (النوع البري) WT و HT على نظام غذائي منتظم (نظام غذائي للماوس/الفئران NIH-07) ويكون بمثابة الضوابط. بعد 3 أشهر ، تحت التخدير العام للاستنشاق (2 ٪ من الأيزوفلورين في الأكسجين) والظروف المعقمة ، يتم تعريض الشريان الأورطي البطني جراحياً ويجدها التقنية التالية: يتم إيقاف تدفق الدم عن طريق إبطال الشريان الأورطي البطن على العمود الفقري مع عقيمة عقيمة تم الضغط على قضيب القطن على مستوى الشرايين الكلوية. بعد 30 ثانية ، يتم الضغط على مقدم توصيل ثانٍ على مستوى التشعب الحرقفي ويتم إصدار أول مقدم توصيل مفاجئ ، يليه إصدار المسلح الثاني. تم إغلاق شق البطن ، ويتم إرجاع الفئران إلى أقفاص المنزل. يستمر العلاج بعد التدخل. بعد أسبوع واحد من الفئران التدخل يتم التخلص من جرعة زائدة من الأيزوفلورين. يتم جمع الدم ، ويتم حصاد الشريان الأورطي وشرائح القولون والجلد. |
| مراجع |
